Producción de anticuerpos policlonales IgY anti Ca.Las en gallinas (Leghorn)

Resumo

El Huanglongbing (HLB) o enverdecimiento de los cítricos es una patología devastadora a nivel mundial. Su diagnóstico se realiza mediante la sintomatología que presentan las hojas y frutos, así como por métodos moleculares, estos últimos son específicos y sensibles. Por otra parte, están los métodos inmunoenzimáticos que son económicos, rápidos y sensibles, pero actualmente esta técnica no ha sido estandarizada para el diagnóstico de HLB. El objetivo de este trabajo fue: Producir anticuerpos policlonales IgY anti-CaLas en gallinas (Leghorn), a partir del antígeno C6XFB8 para su posible implementación en un método de diagnóstico inmunoenzímatico.  La producción de anticuerpos policlonales IgY se realizó inmunizando a gallinas con 50 µg/ml del antígeno C6XFB8, diluido en 50 µl/ml de solución fisiológica estéril y 50 µg/ml del adyuvante completo de Freund. Las gallinas fueron inoculadas subsecuentemente hasta los 75 días con un intervalo de 15 días con la misma concentración del antígeno, pero a diferencia de la primera inmunización se utilizó adyuvante incompleto. Después de cada inmunización, se colectaron los huevos y se extrajo la yema. Los anticuerpos se purificaron y posteriormente se cuantificaron por el método de Bradford. La evaluación de pureza se realizó mediante perfil electroforético y western blot. Se obtuvieron valores de 1.35 a 1.78 mg/ml en las primeras inmunizaciones, y fueron aumentando después de las post inmunizaciones de 2.46 a 2.51 mg/ml de IgY anti-Ca.Las, los cuales son valores que se consideran adecuados para su uso en el desarrollo de un método inmunoenzimático para la detección de Ca.Las.